
2024年9月由无锡农牧业学校张万刚教学团对在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章,研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低(P < 0.05),并表现出剂量依赖性的抑制作用,其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化,进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物体为该研究提供了亚硝基化装饰组学拜谱生物,助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。
简体中文主题:体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响
杂志期刊:Journal of Agricultural and Food Chemistry
2026年反应细胞:5.7
刊登日子:2024年9月
消费者政府部门:南京农业大学
深入分析原材料:蛋白
拜谱展示技艺:亚硝基化修饰组学
方法路径:
一、研发然而
01.Caspase-3催化活性
现今尚不知道NO对caspase-3的促使用途是归因于NO介导的S-亚硝基化,差异氧浓度等度的GSNO是外源性NO提供,以引发caspase-3的体内S-亚硝基化。没想到表述,与如果没有GSNO的组相较于,100、200和400μM GSNO组的caspase-3化学活化差异性降(图1),与原先新闻稿同步。GSNO外理降caspase-3化学活化的不确定性现象仍欠缺阐释。
图1 有差异 渗透压的GSNO办理对caspase-3生物的后果
02.Caspase-3的S-亚硝基化因素
探讨Caspase-3的亚硝基化数量,以证明GSNO对Caspase-3的响应性。经GSNO处置后,测试到caspase-3蛋清S-亚硝基化水平增长(图2)。那些的结果证明,外源性GSNO的培养可成功创业介导caspase-3的身体外S-亚硝基化。惹人咋舌的是,在都没有GSNO会出现的参考组中测试到一名细小的S-亚硝基化带,这证明caspase-3几率遭受内源性的S-亚硝基化。不但,本探讨中caspase-3的S-亚硝基化数量较高,而caspase-3的生物拉低,这与以往的探讨不一。那么,caspase-3的特女性朋友S-亚硝基化淡化位点尚不非常清楚,还需进一点的探寻。
图2 GSNO处置对caspase-3S-亚硝基化含量的作用
03.Caspase-3的S-亚硝基化位点
通过亚硝基化掩盖组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明,caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰(图3)。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中,分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶,其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化,说明Caspase-3易受亚硝基化修饰(图4)。此外,据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163,这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断,半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的,这可能影响蛋白降解,促进死后衰老。
图 3 caspase-3的字段。粉色标示的字段表达出来S-亚硝基化肽,黑色标示的C表达出来S-亚硝基化半胱氨酸
图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪
04.S-亚硝基化Caspase-3溶解结血清
结核球球核淀粉酶用于其中一种更为重要的人体生殖细胞骨架核球球核淀粉酶,在持续时间肌人体生殖细胞格局的格局完好性和缩小性各方面起着更为重要效用,科研S-亚硝基化caspase-3对结核球球核淀粉酶溶解的敏感脆弱性更具更为重要真正意义。与Std(未用胱天核球球核淀粉酶酶-3和GSNO孵育的一开始肌植物黏胶纤维核球球核淀粉酶)组比较,0 μM GSNO组(肌原植物黏胶纤维和caspase-3的孵育,无GSNO)的完好结核球球核淀粉酶含锌量的偏态变低,表面caspase-3对结核球球核淀粉酶更具不确定的核球球核淀粉酶水解反应程度。在GSNO孵育后,完好结核球球核淀粉酶的含锌量的比较明显提升(P < 0.05)。还有,当GSNO质量浓度上升时,完好结核球球核淀粉酶的含锌量的持续时间调整(P < 0.05)(图5)。某一发觉表面,SNO呈现的caspase-3以程度依懒的具体方法抑制作用结核球球核淀粉酶的溶解。
图5.S-亚硝基化caspase-3吸附结血清
05.S-亚硝基化Caspase- 3降解塑料肌钙蛋白质-T
肌钙球淀粉酶-T (TnT)是原肌球球淀粉酶调整开展力量内缩的细细的的所需肌原氯纶球淀粉酶。TnT的分解功能是的检查到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化环境下,caspase-3对TnT的分解情形如图是6提示,与Std组(包括caspase-3和GSNO的肌原氯纶)比起,caspase-3组中30 kDa TnT电影情节为相关系数添加,揭示caspase-3积极参与了TnT的分解,不但,caspase-3与GSNO的孵育形成30 kDa TnT的大幅度减低。在100和200 μM GSNO组两者之间不的检查到显然的差距(P > 0.05),而当GSNO的密度完成400 μM 时,该电影情节为相关系数缩短(P < 0.05)。等等出现 揭示了SNO突显的caspase-3对TnT分解的抑止功能。结球淀粉酶和TnT是caspase-3的强烈底物,而GSNO操作大幅度减低caspase-3的活力酶类可能会形成肌原氯纶球淀粉酶分解的情况大幅度减低。所写所写,NO诱导性的S-亚硝基化都可以使用突显半胱氨酸残基来调整caspase-3的活力酶类,继而进一次不良引响其对结球淀粉酶和TnT的球淀粉酶溶解水平,而使不良引响鸡肉茶叶品质。
图6. S-亚硝基化caspase- 3可降解肌钙蛋清-T
二、个人心得体会
本研究研究综述指在研究综述S-亚硝基化对caspase-3表达的引发及很快对羊肉肌原仟维棉身体之外降解塑料的引发。淀粉酶S-亚硝基化可以表达caspase-3的半胱氨酸残基,以此引发caspase-3亲水性减轻,进三步遏制了其对羊肉肌原仟维棉淀粉酶的淀粉酶油脂水解业务能力。三、拜谱个人总结
钻研主要包括了酶活测试,亚硝基化突显组学分析一下,WB等查测技术,知道球淀粉酶S-亚硝基化能否突显caspase-3的半胱氨酸残基,这造成了caspase-3可溶性的削减,齐头并进一部能够抑制了其对牛肉片肌原氯纶球淀粉酶的球淀粉酶水解反应程度。本钻研为解释一下球淀粉酶质亚硝基化对吃起来的调节逻辑带来了打了个个新的第一视角。拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司,可提供完善成熟的蛋清质组学、绘制蛋清质组学、细胞代谢组学、转录组学等多组学产品技术服务体系,整合多组学数据进行深入挖掘分析,全面解析机制机理等,助力高分文章发表。除此之外,拜谱生物还可提供半胱氨酸全系列护肤品,包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺碱化、total氧化反应呈现、分离巯基,欢迎大家咨询!
分类文献资料:
Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663